外泌體是直徑為30-150 nm的小細(xì)胞外囊泡。在生理和病理條件下,幾乎所有類型的細(xì)胞都可以釋放外泌體,在細(xì)胞通訊和表觀遺傳調(diào)控中發(fā)揮重要作用。外泌體天然存在于體液中,包括血液,唾液,尿液和腦脊液等,內(nèi)部含有其來源細(xì)胞的核酸,蛋白等物質(zhì),因此基于外泌體的疾病診斷和治療方法得到了深入的研究。但是如何拿到純凈的外泌體一直是外泌體研究所面臨的難題之一,因此研究人員也開發(fā)了許多外泌體分離的方法,來一起看一下吧。
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切向流過濾(TFF)在外泌體研究中的應(yīng)用?
切向流過濾(TFF)是一種過濾技術(shù),其特點是液體流動方向與過濾方向垂直。這種技術(shù)在外泌體研究中具有du特的優(yōu)勢,因為它不會直接擠壓外泌體,而是通過輕柔的切向作用流過濾膜,從而減少對外泌體等柔性囊泡的破壞,保證其完整性?1。
TFF技術(shù)在外泌體分離中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在其能夠高效、無損地分離外泌體。東南大學(xué)劉松琴教授團(tuán)隊開發(fā)了一種基于雙切向流(DTFF)的微流控分離裝置,該裝置結(jié)合了雙切向技術(shù)和兩種孔徑的納米多孔膜,能夠高效分離和富集直徑在30 nm至200 nm之間的外泌體?12。這種裝置通過構(gòu)建兩種不同尺寸的分離界面,限定待分離生物囊泡的上下限,從而提高了分離效率,防止了膜的堵塞?1。
00001. ?無損分離?:TFF技術(shù)通過輕柔的切向作用流過濾膜,減少了對外泌體等柔性囊泡的破壞,保證了其完整性?1。
00002. ?高效分離?:雙切向流過濾裝置通過增加濾液與納米多孔膜的接觸面積,提高了分離效率,防止了膜的堵塞?2。
00003. ?操作簡便?:與超速離心(UC)相比,TFF技術(shù)操作簡便,時間更短(<120分鐘),且純度更高(82.8%),回收率顯著提高(77.8%)?。
基于TFF技術(shù)的微流控裝置在臨床應(yīng)用中顯示出良好的前景。從不同疾病患者血清中分離出的外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析結(jié)果顯示,該方法能夠提供更豐富的疾病相關(guān)信息,證明了其在未來臨床上的實用性?2。
綜上所述,切向流過濾技術(shù)在保證外泌體完整性的同時,提高了分離效率,具有廣泛的臨床應(yīng)用前景。